Câu 1: RE loại II:

Enzym loại II bao gồm những enzym có trình tự nhận biết chuỗi nucleotide đặc hiệu. Khi nhận biết trình tự đó, chúng cắt ngay vị trí nhận biết. Phân tử lượng thấp hơn loại I, và chỉ cần Mg+2 làm cofactor và không cần năng lượng ATP.

1. Trình tự nhận biết của enzym giới hạn loại II:

Có thể nói RE loại này là những công cụ thực thụ để cắt các đoạn DNA. Sự cắt này xảy ra ở một vùng đặc biệt được nhận biết bởi enzym. Mỗi một enzym nhận biết một đoạn nucleotide khác nhau rất đặc hiệu đối với nó và được gọi là trình tự nhận biết hay đoạn đọc ngược xuôi.

Đặc trưng quan trọng nhất của trình tự nhận biết là chúng có cấu trúc đối xứng nghịch đảo, nghĩa là hai mạch của trình tự hoàn toàn giống nhau khi đọc theo chiều 5’_3’ ở mỗi sợi đơn. Các trình tự nhận biết của enzym giới hạn được cấu tạo từ 4 đến 6 đôi bazơ.

Ví dụ:

5’_GAATTC_3’

3’_CTTAAG_5’

2. Các kiểu cắt DNA của enzym giới hạn loại II

Cắt đầu bằng: Một số RE tạo vết cắt trên phân tử DNA ngay chính giữa palindrom, tạo ra hai đoạn DNA đầu bằng. Sau khi cắt hai đầu không có khả năng tự kết hợp trở lại.

Ví dụ: HpaI

G

T

T

A

A

C

C

A

A

T

T

G

G

T

T

C

A

A

A

A

C

T

T

G

Cắt đầu dính ( đầu lệch ): cắt bên này và bên kia của tâm đối xứng để tạo ra hai đầu lệch nhau một vài bazo. Trong trường hợp này các đầu dính bổ sung có thể bị bắt cặp trở lại. Như vậy khi các DNA khác nguồn nhưng cùng có trình tự nhận biết của một RE, sau khi bị cắt sẽ có các đầu dính bổ sung giống nhau nên các đoạn DNA khác nguồn có thể nối lại để tạo ra những phân tử lai. Đây là cơ sở của phương pháp tạo dòng gen, một phương pháp thúc đẩy sự phát triển của công nghệ di truyền.

Ví dụ: EcoRI

  ↓

GAATTC

CTTAAG

             ↑