3.2.1. Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà - HA (Haemagglutination test)

 Nguyên lý: Do trên capxit của virus có một bán kháng nguyên HN (Haemagglutinin Neuraminidaza) có khả năng gắn với thụ thể của hồng cầu làm các hồng cầu dính kết với nhau, rồi sau đó cắt đứt các thụ thể hồng cầu để chúng lại rời nhau ra.

 Mục đích:

 Xác định virus có khả năng gây ngưng kết hồng cầu

 Xác định nồng độ virus cao hay thấp.

 Xác định đơn vị ngưng kết dùng cho phản ứng HI

Chuẩn bị: Hồng cầu gà 1%: - Lấy 10ml máu gà + 5ml Citrat Na 5% để chống đông - ly tâm 1000 vòng/5-10 phút, bỏ bạch cầu và huyết tương - Cho nước sinh lý vào rửa hồng cầu và ly tâm tiếp, loại bỏ phần nước trong. Làm như vậy 3 lần. - Lấy hồng cầu đặc pha với nước sinh lý thành nồng độ 1%. Nước trứng có virus : Lấy bệnh phẩm, xử lý, tiêm huyễn dịch bệnh phẩm qua trứng, khi phôi chết, mổ trứng thu nước để phát hiện virus

 Tiến hành phản ứng :

Thực hiện trên tấm nhựa vi ngưng kết (Microwell plates) có 96 lỗ đáy:

Chữ U

Hoặc chữ V

 Cho vào dãy phản ứng theo sơ đồ sau:

Để yên 15-20 phút rồi đọc kết quả 

- Phản ứng dương tính : Hồng cầu ngưng kết (NK) nằm rải đều thành mảng ở đáy lỗ. 

- Hiệu giá ngưng kết : Là độ pha loãng virus lớn nhất mà tại đó vẫn có hiện tượng ngưng kết hồng cầu rõ. 

Ví dụ : 

 ở nồng độ 1/16 có NK, 1/32 không có NK  hiệu giá NK là 1/16 

 1/16 là một đơn vị NK hay 1 đơn vị HA 

 Hiệu giá NK càng lớn ,nồng độ virus trong hỗn dịch càng cao 

Phản ứng âm tính: Hồng cầu lắng xuống đáy thành một cục màu đỏ, nước bên trên trong.